双抗体夹心法（Double Antibody Sandwich Assay, DAS）是一种广泛应用于免疫学和生物化学领域的检测技术，特别是在抗原的定量或定性检测中。该方法利用两种不同的抗体特异性地识别目标抗原，构成一种“夹心”结构，从而提高检测的特异性和灵敏度。双抗体夹心法常用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫组化（IHC）等实验中。

原理
双抗体夹心法的基本原理是：利用一种抗体（捕获抗体）首先固定在固相载体（如微孔板）上，随后抗原与该抗体结合，形成捕获抗原复合物。然后，另一种抗体（检测抗体），通常与酶或荧光标记物相结合，能够与已捕获的抗原结合，形成"夹心"结构。通过检测 抗体上的标记物，能够间接推测出目标抗原的浓度。

步骤
捕获抗体的固定：

首先，将特异性捕获抗体固定到固相载体（如96孔板）的表面。捕获抗体通常针对目标抗原的一个特定位点。

加入样本：

将含有目标抗原的样本加入到孔板中。目标抗原会与捕获抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

洗涤：

洗涤步骤用于去除未结合的物质，确保只保留与捕获抗体结合的抗原。

加入检测抗体：

加入 种抗体（检测抗体），该抗体通常是与酶（如辣根过氧化物酶HRP）或荧光物质相结合的。该抗体能够与捕获的抗原结合，形成"夹心"复合物。

再次洗涤：

通过洗涤去除未结合的检测抗体，只保留与抗原结合的检测抗体。

底物反应：

对于酶标记的检测抗体，加入底物溶液（如过氧化氢和显色底物），通过酶的催化作用，底物转化为可检测的信号（通常是颜色变化）。

信号检测：

通过光密度（OD值）测量，确定颜色的变化程度，进而推测样本中抗原的浓度。